尽管科学家们对感音性耳聋的治病机制进行了广泛研究，但迄今为止，已经被食品药物管理局（FDA）批准可用于治疗听力损失的药物非常少。蛋白激酶可调节关键的细胞功能，许多激酶抑制剂已被FDA批准用于人类疾病治疗。2020年，克瑞顿大学的Matthew A Ingersoll教授团队在Science Advances杂志发表了题目为"BRAF inhibition protects against hearing loss in mice"的文章，报道BRAF激酶小分子抑制剂达拉菲尼及其它6个BRAF/MEK/ERK通路的抑制剂能够减轻顺铂诱导的毛细胞损失。

　　达拉菲尼能够透过血迷路屏障，是FDA批准用于临床治疗癌症的口服药物，可用于治疗BRAF活化的多种癌症，如黑色素瘤、小细胞肺癌、甲状腺和胆道癌。此团队采用成年小鼠耳聋模型，进一步证实达拉菲尼能够预防和减轻顺铂或噪声诱导的听力损失。当达拉菲尼和AZD5438(2018年报道的听觉保护药物)联用时，噪声所致耳聋小鼠的听力完全恢复。这一发现将促进达拉菲尼应用于听觉临床研究，造福耳聋病人。

　　团队首先使用了HEI-OC1细胞系和顺铂损伤模型对162种小分子激酶特异性抑制剂进行无偏筛选。采用 Caspase-3/7活性测定法检测细胞凋亡，结合细胞活性试验确定化合物对HEI-OC1细胞是否有保护作用。在被测试的化合物中，对细胞保护作用最好的药物包括4个 BRAF 特异性抑制剂。BRAF 是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶RAF家族的成员，在 Ras/RAF/MEK 信号转导通路中发挥着重要的作用，并参与调节细胞增殖和细胞存活。从胚胎18.5天(E18.5)开始，BRAF便可在小鼠内耳(HCs和SCs)中检测到。前人研究报道：在噪声损伤后，小鼠内耳中磷酸化ERK的表达上调，并触发细胞凋亡信号通路。因为 达拉菲尼已经被FDA批准用于人类癌症的治疗，并且是口服生物利用型，因此团队选择 达拉菲尼 继续研究其毛细胞保护作用。

　　在MAPK级联通路中，BRAF直接磷酸化并激活MEK,而MEK可磷酸化并激活ERK.团队采用小鼠耳蜗外植体培养方法和顺铂损伤毛细胞模型，证实4种BRAF抑制剂（达拉菲尼、Vemurafenib、PLX-4720和RAF-265）、2种MEK抑制剂（Trametinib和Mirdametinib）以及ERK抑制剂AZD0364对顺铂所致毛细胞毒性有显著的抑制作用。并且，达拉菲尼和Trametinib的联合使用可进一步抑制顺铂诱导的毛细胞毒性。Western blot检测结果显示：顺铂处理后，随着时间的增加，BRAF、MEK和ERK的磷酸化显著增加；给予达拉菲尼处理后，BRAF、MEK和ERK的磷酸化显著降低。

　　研究人员通过耳蜗外植体免疫荧光染色进一步明确了此结论：耳蜗外植体经顺铂处理不同时间后，磷酸化ERK增加，达拉菲尼预处理可逆转顺铂诱导的ERK通路激活。这些实验结果说明达拉菲尼确实抑制了BRAF/MEK/ERK通路激活从而发挥毛细胞保护作用。团队进一步采用成年小鼠耳聋模型研究达拉菲尼是否具有听觉保护作用。结果显示：提前给予达拉菲尼 (100mg/kg/d) 不仅能够预防顺铂导致的听力损失，也能够预防噪声诱导的毛细胞丢失和听力损失。同样，达拉菲尼对顺铂诱导的斑马鱼神经丘毛细胞丢失也具有抑制作用。

　　那么达拉菲尼在发挥听力保护作用时，是否会降低顺铂的肿瘤杀伤效果呢？

　　研究结果证实，达拉菲尼没有降低顺铂杀伤肿瘤细胞的作用。事实上，在IMR-32 和SHP-77肿瘤细胞系中，达拉菲尼增强了顺铂杀伤肿瘤细胞的作用。最后，团队研究了达拉菲尼是否能用于噪声性耳聋的治疗，先用噪声导致小鼠耳聋，再给予药物研究其听力挽救作用。研究结果显示，单独用达拉菲尼或AZD5438(CDK2抑制剂)都有一定的听力保护作用，但不能达到完全的听力恢复。而当联合应用达拉菲尼和AZD5438时，小鼠听力几乎完全恢复，达到了非常理想的治疗效果。

　　研究结果显示：BRAF/MEK/ERK通路不但在肿瘤细胞中起关键作用，而且在有丝分裂后的耳蜗毛细胞中发挥促凋亡和应激激活的作用。BRAF抑制剂达拉菲尼可用于防治顺铂或噪声所致的听力损失，有望成为FDA批准的首批用于听力保护的药物之一。如有需要，请咨询康必行海外医疗医学顾问：4006-130-650或扫码添加下方微信，我们将竭诚为您服务！点击拓展阅读：达拉非尼/达拉菲尼(TAFINLAR)治疗黑色素瘤的疗效如何？

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