将马法兰对多种肿瘤细胞株进行活性测试，实体和血液肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)总平均值为0.41 uM, 远低于L-PAM (18 uM)。耐药肿瘤细胞系的体外研究表明马法兰的有效性比L-PAM大约提高了300倍。对原发肿瘤细胞进行体外研究，马法兰对乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌样本比肾癌和结肠癌样本更容易产生细胞毒性效应。同样，L-PAM IC-50的总体平均水平也显著提高。在骨肉瘤细胞中，马法兰的细胞毒性效应与氨肽酶活性水平之间存在明显的相关性。Melflufen在甲氨蝶呤或依托泊苷耐药的骨肉瘤细胞中也被证明具有更强的细胞毒活性，这证实了马法兰在去除化学耐药瘤变中的潜在用途。多柔比星能够上调氨肽酶的表达，与马法兰的细胞毒活性产生协同作用，这可以作为支持多柔比星与马法兰联合化疗的理论基础。

　　考虑到L-PAM在治疗多发性骨髓瘤中不可置疑的作用，本研究转移到骨髓瘤细胞上。首先，在MM细胞系中建立了氨肽酶的活性以及随后氨肽酶依赖的马法兰卵裂。其次，研究表明，骨髓瘤细胞株RPMI-8226和阿霉素耐药细胞株的L-PAM耐药亚克隆对马法兰的敏感性分别提高了10倍和2.5倍，这是由于L-PAM累积和暴露。Melflufen克服L-PAM耐药机制的方式尚未完全阐明。第三，马法兰抑制血管内皮生长因子诱导的骨髓瘤细胞迁移。最后，利用人浆细胞瘤MM.1S异种移植小鼠模型对马法兰的体内药效进行实验，结果显示马法兰显著抑制了骨髓瘤生长，从而延长小鼠生存期。

　　这些体外和体内的临床前研究报告表明，马法兰可以诱导更快、更强、永久性的DNA损伤，从而克服MM细胞对L-PAM的耐药性。综上所述，马法兰可以与常用的抗骨髓瘤药物(如来那度胺、硼替佐米和地塞米松)产生协同作用，这为临床试验铺平了道路。

　　首次人体I/II期临床试验

　　一项前瞻性、首次在人体内进行的剂量探索I/IIa期研究，设计用于晚期和进行性肿瘤患者，主要是乳腺癌、卵巢癌淋巴瘤和肺癌。临床I期试验中，在45例患者中用马法兰进行6个周期每三周一次的30分钟静脉输液来确定II期试验中马法兰的推荐剂量，II期试验的目的是评估马法兰的安全性及药动学特征，以及肿瘤反应结果。在25mg和50 mg时没有观察到剂量限制性毒性，而在高剂量时，可逆性中性粒细胞减少和血小板减少是主要的剂量限制性毒性，在重度治疗患者中更为显著。因此，II期最终的推荐剂量为50mg.每三周给癌症患者服用50mg 马法兰是安全的，其毒性与烷基化剂相似。

　　O-12-M1 试验

　　O-12-M1 (NCT01897714)是一项开放标签、多中心、国际I/II期研究，旨在确定马法兰联合地塞米松的剂量和给药方案，并评估后线治疗难治性RRMM患者的反应。该试验纳入了75名既往治疗过的MM患者。在I期试验中，每周分为4个剂量水平(15,25,40,55mg)静脉输注马法兰 30分钟，同时口服地塞米松40mg,每周期为21天。由于6例接受55mg剂量的患者中有4例出现4级剂量限制性血液毒性，故推荐剂量为40 mg.在II期试验中，共纳入58例患者;45例患者在每个周期的第1天接受40 mg 马法兰 + 每周一次40 mg地塞米松的治疗，每周期为21天，13例患者在每个周期的第1天接受马法兰单药40 mg 的治疗。

　　将28例(62%)患者纳入联用队列，数据安全监测委员会修订了方案，将周期长度增加到28天，以允许周期之间的血液学恢复。随后17例(38%)患者接受28天周期的治疗。ORR[≥部分缓解(PR)]为31%(14/45例)，中位缓解持续时间(DOR)为8.4个月。在接受>2剂(14/34例)研究治疗的患者中，ORR为41%。仅接受马法兰患者的ORR为8%。中位随访时间为27.9个月， DOR为8.4个月，中位无进展生存期(PFS)为5.7个月，中位总生存期(OS)为20.7个月。在随后的分析中，中位随访时间为46个月，中位OS为20.7个月，至后续(二线)治疗时间为7.9个月。最常见的不良事件(AEs)是血小板减少(73%)、中性粒细胞减少(69%)、贫血(64%)、发热(40%)和虚弱(31%)。38%的患者发生严重AEs (SAEs);最常见的SAE为肺炎(11%)。最常见的马法兰 相关3/4级AEs是血小板减少(58%)和中性粒细胞减少(58%)。因此，在既往治疗过的MM患者中，马法兰联用地塞米松是可管理的。

　　HORIZON (OP-106) 试验

　　HORIZON (OP-106)是一项关键的单臂、多中心、II期研究，旨在评估马法兰联用地塞米松对泊马度胺和/或抗CD38单克隆抗体难治RRMM患者的疗效和安全性。患者在每周期（28天）的第1天静脉滴注40mg马法兰，口服地塞米松。共纳入157名患者。中位年龄为65岁; 中位既往治疗线数为5.157例患者中有119例(75.8%)为三重难治性患者，97%为后线难治性患者。总ORR为29%，三重难治性患者的ORR为26%，中位随访14个月，DOT、中位PFS和中位OS分别为5.5个月、4.2个月和11.6个月。最常见的3/4级急性AE是血液学事件：中性粒细胞减少(79%)、血小板减少(76%)和贫血(43%)，而最常见的3/4级非血液学急性AE是肺炎(10%)。该试验以及O-12-M1试验证实了马法兰和地塞米松联合治疗既往治疗RRMM患者的临床疗效和可管理的安全性，包括那些三重难治性患者。如有需要，请咨询康必行海外医疗医学顾问：4006-130-650或扫码添加下方微信，我们将竭诚为您服务！点击拓展阅读：马法兰/玛法兰(MELPHALAN)联合地塞米松治疗难治性多发性骨髓瘤安全有效？

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