尼洛替尼/达希纳( nilotinib,1)，化学名为4- 甲基-N-[3-(4- 甲基-1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基) 苯基]-3-[[4-( 吡啶-3- 基) 嘧啶-2- 基] 氨基] 苯甲酰胺，商品名达希纳(Tasigna)，是由瑞士诺华制药公司研发的ABL 酪氨酸激酶抑制剂[1]。该药于2007 年10 月获美国FDA 批准上市，主要用于治疗既往治疗耐药或不耐受的费城染色体阳性的慢性髓性白血病(Ph+CML) 慢性期或加速期成人患者[2,3]。目前尚未见有关1 原料药质量标准研究的文献报道，为研究并控制1 的质量，本研究根据1 的结构特征及工艺路线( 图1)，合成了可能存在的5 种有关物质[4,5]，并进行了结构确证。

　　3-(4- 甲基-1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基) 苯胺( 2) 是合成1 的重要中间体，而合成2 所用的原料4- 甲基咪唑含有工艺中不能除尽的4- 乙基咪唑、咪唑及2,4- 二甲基咪唑。它们会和3- 溴-5- 三氟甲基苯胺反应，生成3-(4- 乙基-1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基) 苯胺、3-(1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基)-苯胺和3-( 2,4- 二甲基-1H- 咪唑-1- 基) -5-( 三氟甲基) 苯胺。此外，4- 甲基咪唑存在2 个活性反应位点(N3 及N5)，3- 溴-5-( 三氟甲基) 苯胺与N3反应，生成甲基异构产物3-( 5- 甲基-1H- 咪唑-1-基) -5-( 三氟甲基) 苯胺。从2 中带入的这4 个杂质中间体参与后续反应，生成与原料药相关的杂质4- 甲基-N-[3-(4- 乙基-1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基) 苯基]-3-[[4-( 吡啶-3- 基) 嘧啶-2- 基] 氨基]-苯甲酰胺(B)，4- 甲基-N-[3-(1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基) 苯基]-3-[[4-( 吡啶-3- 基) 嘧啶-2- 基]-氨基] 苯甲酰胺(C)，4- 甲基-N-[3-(2,4- 二甲基-1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基) 苯基]-3-[[4-( 吡啶-3- 基) 嘧啶-2- 基] 氨基] 苯甲酰胺(D) 和4-甲基-N-[3-(5- 甲基-1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基)-苯基]-3-[[4-( 吡啶-3- 基) 嘧啶-2- 基] 氨基] 苯甲酰胺(E)。

　　有关物质A 是合成1 的最后一步反应中缩合反应不完全而残留的中间体。本研究以氢氧化钾为碱，加热至80 ℃对4- 甲基-3-[[4-(3- 吡啶基)-2- 嘧啶基] 氨基] 苯甲酸乙酯(3) 进行水解得到。

　　参照文献，用3- 溴-5-( 三氟甲基) 苯胺和4-乙基-1H- 咪唑反应得到的3-(4- 乙基-1H- 咪唑-1-基) -5-( 三氟甲基) 苯胺，与酰氯化的A 缩合制得有关物质B[6]。

　　有关物质C 和D 的合成方法未见文献报道。本研究在考察1- 溴-3- 硝基-5- 三氟甲苯和3- 溴-5- 三氟甲基苯胺的反应活性差异后，先用1- 溴-3-硝基-5- 三氟甲苯和咪唑或2,4- 二甲基-1H- 咪唑反应制得硝基取代物，硝基还原后得到3-(1H- 咪唑-1- 基) -5-( 三氟甲基) 苯胺或3-(2,4- 二甲基-1H-咪唑-1- 基) -5-( 三氟甲基) 苯胺，最后与酰氯化的A 缩合得到有关物质C 和D.

　　有关物质E 的合成方法也未见文献报道。在合成时发现，参照有关物质B ～ D 的合成方法制备有关物质E 的收率均极低( 大部分生成4- 甲基产物)，故本研究选择从2 的母液中通过制备液相的方法分离制得3-(5- 甲基-1H- 咪唑-1- 基) -5-( 三氟甲基) 苯胺，再与酰氯化的A 缩合制得有关物质E.

　　实验部分

　　4- 甲基-N-[3-(4- 乙基-1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基) 苯基]-3-[[4-( 吡啶-3- 基) 嘧啶-2- 基]-氨基] 苯甲酰胺( 有关物质B)

　　在50 ml 三颈瓶中加入4- 乙基-1H- 咪唑(1.2 g,12.1 mmol)、碳酸钾(2.2 g,15.8 mmol)、碘化亚铜(0.4 g,2.3 mmol)、8- 羟基喹啉(0.3 g,1.5 mmol)和DMF(20 ml)，氮气置换3 次后常温搅拌20 min,缓慢滴加3- 溴-5-( 三氟甲基) 苯胺( 3.6 g,15.1 mmol) 的N- 甲基吡咯烷酮( 5 ml) 溶液，滴毕后升温至120 ℃反应20 h.冷却至室温，加入水(30 ml)，用乙酸乙酯( 40 ml) 萃取，有机相用饱和氯化钠溶液(30 ml×3) 洗涤，经无水硫酸钠干燥后过滤，滤液用活性炭脱色1 h,减压蒸干后得到深黄色固体(2.3 g)。加入甲苯(10 ml) 溶清后缓慢降温至-5 ℃析晶，同温搅拌5 h,过滤得淡黄色固体(1.26 g)，直接用于下步反应。

　　4- 甲基-N-[3-(1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基)-苯基]-3-[[4-( 吡啶-3- 基) 嘧啶-2- 基] 氨基] 苯甲酰胺( 有关物质C)

　　在50 ml 三颈瓶中加入咪唑(1.15 g,16.9 mmol)、碘化亚铜(0.48 g,2.5 mmol)、碳酸钾(2.56 g,18.5 mmol) 和DMF(20 ml)，氮气置换3 次后常温搅拌20 min,缓慢滴加1- 溴-3- 硝基-5-( 三氟甲基)-苯(5.0 g,18.5 mmol) 的THF 溶液(5 ml)，滴毕升温至120 ℃反应24 h.冷却至室温，加入水(30 ml)和乙酸乙酯(30 ml) 萃取，有机相用饱和氯化钠溶液(30 ml×3) 洗涤，经无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压蒸干，所得黑色油状物用乙醇(10 ml) 溶解后，加入活化后的锌粉(2.2 g,33.8 mmol)，搅拌冷却至0 ℃，缓慢滴加冰乙酸(15 ml)，滴毕反应20 min 后过滤，滤液减压蒸除大部分溶剂，剩余物中加入14％氨水(25 ml)，用乙酸乙酯(20 ml) 萃取，有机相减压蒸干，剩余暗黄色油状物经柱色谱[ 洗脱剂：二氯甲烷∶三乙胺(10 ∶ 0.1) →二氯甲烷∶甲醇∶三乙胺(9.5 ∶ 0.5 ∶ 0.1) ] 分离，得淡黄色固体(1.15 g)，直接用于下步反应。

　　4- 甲基-N-[3-(5- 甲基-1H- 咪唑-1- 基)-5-( 三氟甲基) 苯基]-3-[[4-( 吡啶-3- 基) 嘧啶-2- 基]-氨基] 苯甲酰胺( 有关物质E)

　　取2 的反应液( 按文献操作[ 7]，3-( 5- 甲基-1H- 咪唑-1- 基) -5-( 三氟甲基) 苯胺含量≤ 3％，100 ml) 浓缩后经制备型液相色谱[HPLC 法：色谱柱 Luna 5u C18 柱(21.2 mm×150 mm,5 μm)；流动相 0.1％氨水∶乙腈(90 ∶ 10→20 ∶ 80)；流速20 ml/min；检测波长 254 nm；柱温 30 ℃ ] 分离，得到类白色固体( 0.23 g)。再参照有关物质B 的合成方法操作，得类白色固体E( 0.21 g,42％ )，mp 251 ～ 252 ℃。纯度99.5％ (HPLC 方法同上，相对1 的保留时间为0.92)。ESI-MS(m/z) : 530[M+H]+；1H NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 9.32(d, J=1.6 Hz, 1H, ArH) , 8.85( d, J=1.6 Hz, 1H, ArH) ,8.68( dd, J=4.8、1.6 Hz, 1H, ArH) , 8.62( s, 1H,CONH), 8.55(d, J=5.3 Hz, 1H, ArH), 8.38(dt, J=8.0、1.9、1.9 Hz, 1H, ArH), 8.10(t, J=1.8 Hz, 1H, ArH),7.97(s, 1H, ArH), 7.62(s, 1H, ArH), 7.60(dd, J=7.8、1.8 Hz, 1H, ArH), 7.42(dd, J=7.8、4.8 Hz, 1H, ArH),7.38(d, J=8.0 Hz, 1H, ArH), 7.31(s, 1H, ArH), 7.25(d,J=5.3 Hz, 1H, ArH), 7.16(s, 1H, NH), 6.93(s, 1H,ArH), 2.46(s, 3H, CH3), 2.25(s, 3H, CH3)。

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