NECTIN4表达对于恩诺单抗诱导的细胞死亡是必要且充分的；然后泌尿科肿瘤治疗的靶向药物策略研究了管腔细胞和基底细胞是否对恩诺单抗具有不同的基线敏感性，发现HT-1376和HT-1197管腔细胞（高内源性NECTIN4）对恩诺单抗比UMUC-3和TCCSUP基底细胞（几乎没有内源性NECTIN4）更敏感),具有很强的抗性。

　　此外，尽管可检测到NECTIN4表达水平，但基础UMUC-14细胞对恩诺单抗诱导的细胞死亡具有抗性，而与HT-1376细胞相比，647V细胞具有中等敏感性（IC 50~3μg/mL）。综上所述，这些结果表明NECTIN4 mRNA和蛋白表达在管腔膀胱癌细胞系中更高，因此，它们对恩诺单抗诱导的细胞死亡也更敏感。

　　接下来，泌尿科肿瘤治疗的靶向药物策略询问luminal HT-1376细胞中NECTIN4的敲低是否可以消除对恩诺单抗的敏感性。为此，泌尿科肿瘤治疗的靶向药物策略生成了表达催化失活dCas9（称为CRISPR干扰或CRISPRi）的HT-1376细胞，并使用5种独特的sgRNA来沉默NECTIN4。泌尿科肿瘤治疗的靶向药物策略发现所有5种sgRNA都有效地沉默了NECTIN4 mRNA和NECTIN4细胞表面蛋白表达>90%，如通过定量聚合酶链反应(qPCR)和表面蛋白染色检测到的。NECTIN4敲低细胞保留了大致相似的管腔形态，具有一些纺锤形特征。

　　重要的是，NECTIN4的缺失导致了恩诺单抗耐药性。具有强大NECTIN4表达的HT-1376对照细胞在0.02μg/ml的恩诺单抗下被完全抑制，而HT-1376 NECTIN4敲低细胞需要1μg/ml的恩诺单抗才能被抑制，这代表了25倍的灵敏度差异。克隆形成试验证实了NECTIN4的缺失赋予对恩诺单抗的抗性的观察结果。NECTIN4的缺失还导致第二种管腔膀胱癌细胞系HT-1197出现恩诺单抗耐药性。

　　为了研究NECTIN4表达是否单独介导恩诺单抗诱导的细胞死亡，泌尿科肿瘤治疗的靶向药物策略在基础UMUC-3细胞系中组成型表达NECTIN4。表面蛋白染色和qPCR表明NECTIN4被强烈表达。

　　此外，通过免疫组化证实NECTIN4蛋白主要定位于UMUC3-NECTIN4过表达（OE）肿瘤异种移植物的细胞表面；在基底UMUC3对照肿瘤异种移植物中未发现可检测的内源性NECTIN4蛋白。重要的是，上调UMUC-3细胞中的NECTIN4表达导致对恩诺单抗的敏感性显着增加，如增殖所证明的那样和克隆形成试验。

　　泌尿科肿瘤治疗的靶向药物策略在第二个基底膀胱癌系TCCSUP中发现了类似的结果。总之，泌尿科肿瘤治疗的靶向药物策略的结果表明NECTIN4表达是恩诺单抗诱导的细胞死亡所必需的，并强调了以下发现：i)NECTIN4的下调或缺失可能是一种重要的耐药机制，并且ii)诱导NECTIN4表达会增加恩诺单抗敏感性。

　　恩诺单抗(enfortumab vedotin-ejfv)是针对肿瘤物靶点Nectin-4的一种属于免疫单抗药物的肿瘤靶向治疗工具。该药物的中名称还包括：恩福妥单抗维多汀。基因解码表明Nectin-4是一种位于细胞表面的粘附蛋白。Nectin细胞粘附蛋白4(Nectin-4)在多种人类恶性肿瘤中过度表达。这种异常表达与癌症进展和不良预后相关。Nectin-4已成为一种潜在的生物标志物和有前途的靶向治疗。临床前模型一致证明Nectin-4位于细胞膜和细胞质中。此外，无论实体瘤的位置如何，Nectin-4都会过表达。有趣的是，在膀胱尿路上皮癌中突出了Nectin-4表达的异质性。高血清Nectin-4水平与治疗效率和疾病进展相关。最后，生成的抗药物缀合靶向Nectin-4在多种肿瘤细胞系中诱导细胞死亡。Nectin-4因其在肿瘤发生和淋巴管生成中的核心作用而成为抗癌药物开发的有希望的靶标。以Nectin-4为靶点的Enfortumab vedotin显示出令人鼓舞的结果，应该扩展到其他类型的实体瘤。

　　恩诺单抗靶基因在膀胱癌的表达研究：基因检测的科学依据

　　由NECTIN4基因（以前称为PVRL4）编码的表面蛋白NECTIN4是一种免疫球蛋白样跨膜蛋白，在尿路上皮癌中高度表达，最近已成为新的药物靶点。Enfortumab vedotin（EV；以前称为ASG-22CE）是一种抗体-药物偶联物(ADC)，可将单甲基auristatin E(MMAE)（一种微管去稳定剂）递送至表达NECTIN4的肿瘤细胞。最近一项恩诺单抗的II期临床试验单药疗法(EV-201)在经过大量预处理的转移性或局部晚期尿路上皮癌患者中表现出44%的总体反应率，这导致FDA加快批准。正在进行多项附加试验，以评估局部晚期和转移性尿路上皮癌使用或不使用免疫检查点抑制剂和/或铂类化疗的EV。随着恩诺单抗进入早期疾病状态并纳入一线环境，了解分子预测对恩诺单抗的反应和描述耐药机制的特征对于最大化临床疗效至关重要。

　　NECTIN4在膀胱癌中的表达尚未明确，迄今为止有限的研究显示出相互矛盾的结果。虽然几乎所有参加EV-201的患者(97%)都有可检测到的NECTIN4 H分数（中位数290；范围14-300），似乎存在表达差异。在一项针对524例原发性膀胱肿瘤的研究中，仅63%的样本具有中度至强H评分(H≥100)。此外，最近的病例系列发现NECTIN4染色高度可变——仅24%纯尿路上皮癌具有中等至强的H评分(H≥100)，而具有混合组织学的肿瘤的尿路上皮成分具有弱和异质染色。

　　尿路上皮癌的分子亚型突出了致癌机制、免疫浸润和临床病理学特征的根本差异。最近，描述了六种关键的共识亚型：管腔乳头状(LumP)、管腔非特异性(LumNS)、管腔非特异性不稳定(LumU)、基底/鳞状(Bas/Sq)、富含基质和神经内分泌样（NE样）。NECTIN4是否在尿路上皮癌的六种分子亚型中普遍且一致地表达仍然未知。佳学基因解码基因检测分析了七个临床数据集中的NECTIN4基因表达，包括顺铂后新辅助化疗队列。基因解码的目标是检查不同膀胱癌亚型的表达差异，并确定单独调节NECTIN4表达水平是否会改变对恩诺单抗的敏感性和耐药性。如有需要，请咨询康必行海外医疗医学顾问：4006-130-650或扫码添加下方微信，我们将竭诚为您服务！点击拓展阅读：恩诺单抗(PADCEV/ENFORTUMAB)相关信息说明介绍

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