维奈托克(Venetoclax) 是一种有效的BH3模拟化合物，BH3结构域存在于BCL-2家族大多数成员的近N端，是细胞凋亡的关键性结构域，可以选择性地阻断抗凋亡B细胞淋巴瘤-2 (B-cell lymphoma 2, BCL-2)蛋白。BCL-2是一种能抑制细胞(包括癌细胞)凋亡的蛋白，但肿瘤患者体内的BCL-2蛋白会阻止肿瘤细胞凋亡，而维奈托克（BCL-2抑制剂）会选择性与BCL-2结合，促进癌细胞死亡。维奈托克是目前慢性淋巴细胞白血病（CLL）和急性髓性白血病（AML）的一线和复发/难治性临床治疗药物，然而维奈托克难以预测的药代动力学特征和药物不良反应包括肿瘤溶解综合征、中性粒细胞减少、血小板减少和男性生育能力下降等，使其临床应用受到限制。临床研究表明，维奈托克主要通过CYP3A4和CYP3A5在肝脏进行代谢，典型的CYP3A4抑制剂（如酮康唑）会显著增加维奈托克在血浆中的浓度。作者为了评估这些代谢酶和转运体对维奈托克药代动力学特征影响和可能的药物-药物相互作用，采用了基因型单一，稳定的FVB小鼠作为维奈托克药代动力学研究的动物模型。建立了UHPLC-MS/MS方法研究FVB小鼠血浆中维奈托克的暴露情况，并将其用于研究服用或不服用酮康唑对维奈托克治疗的雄性和雌性FVB小鼠的药代动力学的影响。
首先，作者将维奈托克溶解在二甲基亚砜（5%）中，然后逐步添加溶媒PEG300（50%）、吐温80（5%）和水（40%）稀释制备为2 mg/mL的口服给药悬浮液，同时将酮康唑溶解在溶媒PEG400中制备10 mg/mL的口服给药悬浮液。为了考察酮康唑以及溶媒PEG400对维奈托克在FVB小鼠药代动力学影响，作者采用35只FVB小鼠进行维奈托克的药代动力学研究，分为三组。其中15只小鼠（10只雄性，5只雌性）按照10 mg/kg剂量单独给予维奈托克，10只小鼠（雌雄各半）在口服溶媒PEG400 30分钟后给予10 mg/kg维奈托克，另外10只小鼠（雌雄各半）在口服50 mg/kg酮康唑30分钟后给予10 mg/kg维奈托克。
作者建立的UHPLC-MS/MS方法的质谱系统为Thermo公司的Vanquish UHPLC系统联用Quantiva三重四极杆质谱仪，色谱柱为Thermo Accucore AQ 液相色谱柱（50×2.1 mm,2.6 μm），流速为0.4mL/min,柱温为20℃。流动相：A相为含0.1 %甲酸的水溶液，B相为含0.1%甲酸的乙腈-甲醇混合溶液（v:v = 50:50），梯度洗脱。采用多反应监测(MRM)模式测定，维奈托克的监测离子对为869.325→321.084，内标（Venetoclax-D7）的监测离子对为876.312→321.083.接下来，作者对该分析方法的定量限、线性范围、基质效应准确度、精密度、稀释可靠性、稳定性、等进行了考察，结果表明该方法能够满足生物样本分析的要求，可以用来研究维奈托克在FVB小鼠体内的药代动力学特征，三组实验动物血浆中维奈托克的药时曲线见图1和2.单独服用维奈托克组（10 mg/kg）的药时曲线如图1所示，雄性小鼠的药时曲线下面积（AUC）是雌性小鼠的1.5倍，结果显示维奈托克在小鼠中的吸收存在性别差异。服用酮康唑组（50 mg/kg）和服用溶媒组（PEG400）30min后口服维奈托克的药时曲线如图2所示，维奈托克的主要药代动力学参数见表1，服用溶媒（PEG400）对维奈托克的浓度影响不大，而酮康唑显著增加维奈托克的AUC（大于2倍）。上述维奈托克的药代动力学研究结果与人-药物相互作用结果一致，表明FVB小鼠可以用于评价维奈托克药代动力学特征。
总之作者建立了一种简便、快速的测定FVB小鼠血浆中维奈托克的UHPLC-MS/MS分析方法。与先前建立的测定人血浆中维奈托克浓度的分析方法相比，该方法只需要微量（5μL）血浆，提取方法简单，色谱分离的运行时间短（4.6 min），满足药代动力学研究的要求。方法学验证表明，该分析方法可以用于药物代谢动力学研究，FVB小鼠可做为维奈托克药代动力学研究的动物模型。
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