本文以JAK/BRD4抑制剂菲达替尼/菲卓替尼为分子模板，根据以往多靶点HDAC抑制剂的设计经验，结合菲达替尼/菲卓替尼与JAK/BRD4的结合模式以及HDAC抑制剂的药效团模型，合理设计了新型HDAC/JAK/BRD4三靶点抑制剂。经过初步体外酶活实验筛选，多个化合物表现出较好的HDAC/JAK/BRD4三靶点抑制活性或HDAC/JAK双靶点抑制活性，特别是化合物25ap，并表现出明显优于SAHA的体外抗增殖活性(2.9μM vs 9.2μM)，而且对正常细胞GES-1的细胞毒性也较低(IC50=32.9μM)。基于菲达替尼/菲卓替尼的新型HDAC/JAK/BRD4三靶点抑制剂用于三阴性乳腺癌的治疗

　　菲达替尼/菲卓替尼和菲达替尼/菲卓替尼/SAHA联用表现出更好的抗增殖活性(IC50=1.4,0.46μM,respectively)，但对GES-1的细胞毒性也较大（IC50=0.89,0.61μM,respectively)。我们推测这可能是因为菲达替尼/菲卓替尼的脱靶效应(Promiscous kinases inhibition and/or other unknown off-targets)导致的。总之，化合物25ap表现出优于SAHA的抗增殖活性和优于菲达替尼/菲卓替尼和菲达替尼/菲卓替尼/SAHA的细胞毒性。

　　Western blot分析结果表明:HDAC/JAK/BRD4三靶点抑制剂或HDAC/JAK双靶点抑制剂确认了它们的target engagement.三靶点抑制剂25ap在TNBC MDA-MB-231cells可以dose-dependently提高Ac-HH3和Ac-Tubulin的水平,降低p-STAT3,c-Myc和MCL-1的水平，表明其可以同时抑制HDAC和BRD4-LIFR-JAK1-STAT3耐药信号通路。为了验证菲达替尼/菲卓替尼对GES-1的细胞毒性是由于脱靶效应导致。在GES-1细胞，1μM菲达替尼/菲卓替尼和1μM 25ap对HDAC/JAK/BRD4的biomarkers表现出类似的效果。然而，30μM 25ap可以显著性的影响HDAC/JAK/BRD4的biomarkers。这些结果表明菲达替尼/菲卓替尼的脱靶效应很大程度上导致了对GES-1的细胞毒性，对TNBC的抗增殖活性也有一定的帮助。

　　此外，化合物25ap可以有效抑制LIFR的表达，诱导MDA-MB-231细胞凋亡，抑制MDA-MB-231 cells的克隆形成。体外小鼠肝微粒体实验表明25ap具有优于菲达替尼/菲卓替尼的稳定性，体内药代动力学实验表明25ap具有较好的生物利用度。体内抗增殖活性表明，25ap可以更有效地抑制肿瘤的生长，表现出良好的安全性。然而，菲达替尼/菲卓替尼给药后表现出较强的毒性。

　　本文以JAK/BRD4抑制剂菲达替尼/菲卓替尼为分子模板，根据以往多靶点HDAC抑制剂的设计经验，结合菲达替尼/菲卓替尼与JAK/BRD4的结合模式以及HDAC抑制剂的药效团模型，合理设计了新型HDAC/JAK/BRD4三靶点抑制剂。其中化合物25ap表现出较好的HDAC/JAK/BRD4抑制活性，可以同时抑制HDAC和BRD4-LIFR-JAK1-STAT3信号通路。其多重抑制效果有助于其抗肿瘤活性：包括有效的抗增殖作用活性，显著的细胞凋亡诱导活性，并抑制集落形成。值得注意的是，25ap具有良好的正常细胞和癌细胞之间的治疗窗口，小鼠微粒体中理想的体外代谢稳定性和体内生物利用度。此外，25ap在MDA-MB-231异种移植模型中表现出较好的抗肿瘤活性。如有需要，请咨询康必行海外医疗医学顾问：4006-130-650或扫码添加下方微信，我们将竭诚为您服务！

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