帕克替尼抑制Janus激酶2是肝纤维化的潜在治疗，作者在之前的研究中发现JAK2敲除可以改善小鼠肝纤维化程度，而本研究发现了JAK2抑制剂帕克替尼在体外可以减少两种人源HSC和原代小鼠HSC的增殖、迁移、收缩以及纤维化标志物的基因和蛋白质表达。此外，体内静脉注射和口服帕克替尼能够减缓ASH和NASH小鼠模型中的肝纤维化进展，口服帕克替尼还改善了ASH小鼠模型中的肝脏脂肪变性，提示JAK2抑制剂帕克替尼可能具有治疗酒精性和非酒精性肝纤维化的前景，为后续的临床开发和应用提供了依据。
帕克替尼靶向JAK2减少HSC的活化和增殖
由于活化的HSC是诱导肝纤维化的主要肝细胞类型，作者构建了HSC特异性敲除JAK2（SM22Cre+-Jak2f/f）小鼠提取原代HSC细胞进行了后续的研究。结果显示，帕克替尼显著降低了WT HSCⅠ型胶原和磷酸肌联蛋白(p-Moesin)的蛋白表达，SM22Cre+-Jak2f/f HSCⅠ型胶原和磷酸肌联蛋白也显著降低，但JAK2特异性敲除使帕克替尼的这一效果消失。此外，作者检测了促纤维化基因（如JAK2、Rock、ACTA2和TGF-β等)的mRNA表达，与上述结果一致。为了进一步验证上述实验结果，作者使用了两种人HSC系（LX-2和TWNT-4）来研究帕克替尼在体外的作用。结果显示在帕克替尼处理后，LX-2和TWNT-4的Ⅰ型胶原和p-Moesin的蛋白表达均显着降低。此外，帕克替尼处理也降低了两种细胞系中与HSC活化相关的其他基因的表达。以上结果说明帕克替尼通过抑制JAK2减弱小鼠原代HSC和两种人HSC系的活化。
随后作者评估了小鼠原代HSC和两种人HSC系的增殖能力。结果显示，帕克替尼处理显著降低了溴脱氧尿苷(BrdU)增殖测定和增殖细胞核抗原(PCNA)的基因表达水平，提示HSC增殖受到抑制。综上所述，以上结果表明帕克替尼JAK2依赖性的减弱了小鼠原代HSC、LX-2和TWNT-4的增殖和活化。
帕克替尼靶向JAK2减弱HSC的收缩和迁移
为了进一步研究帕克替尼对HSC活化的影响，作者评估了小鼠原代HSC和两种人HSC系的收缩能力。结果显示帕克替尼处理的小鼠原代HSC和SM22Cre+-Jak2f/f HSC收缩能力显著下降，在LX-2和TWNT-4中显示出了相似的结果，说明肌成纤维细胞比例减少。基于上述JAK2抑制对纤维发生、增殖和收缩的影响，随后作者评估了它们的迁移能力。细胞伤口愈合试验结果显示，帕克替尼处理后细胞迁移能力显著下降。综上所述，这些结果表明帕克替尼靶向JAK2显著降低了HSC的激活，表现为细胞活化、增殖、收缩和迁移减少，提示帕克替尼对导致肝纤维化进展的关键肝细胞类型具有潜在治疗作用。
静脉注射帕克替尼可改善CCl4/乙醇诱导的小鼠肝纤维化
为了进一步研究帕克替尼对肝纤维化的治疗效果，作者评估了抑制JAK2对小鼠酒精性脂肪肝（ASH）模型中肝纤维化的影响。在小鼠饮用水中加入乙醇（第一周4%，第二周8%，第3-7周16%）并腹腔注射CCL4（2μL/g，25%稀释于橄榄油）7周构建ASH模型，在第4-7周尾静脉注射帕克替尼65μg/ml每周两次以评估其治疗效果。结果显示，静脉注射帕克替尼治疗后显著降低了CCl4/乙醇诱导小鼠升高的ALT、AST水平。H&E染色结果显示，静脉注射帕克替尼治疗后改善了肝损伤程度。天狼星红染色和α-SMA免疫组化染色结果显示，静脉注射帕克替尼治疗后肝纤维化程度显著减轻。此外，静脉注射帕克替尼还显著减少了小鼠肝脏纤维化相关的蛋白和mRNA表达水平。考虑到饮酒还会引起肝脏的脂肪变性，作者检测了ASH小鼠的固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP-1C)和脂肪酸合成酶(FASN)的mRNA表达水平，结果显示静脉注射帕克替尼治疗后无显著变化。这些结果表明静脉注射帕克替尼治疗可改善ASH小鼠的肝损伤和纤维化程度，但不会影响其脂肪变性。
口服帕克替尼可改善CCl4/乙醇诱导的小鼠肝纤维化
接下来鉴于临床帕克替尼是口服给药，作者研究了口服帕克替尼是否与静脉注射一样有效。结果显示，口服帕克替尼治疗后显著降低了CCl4/乙醇诱导小鼠升高的ALT、AST水平。H&E染色结果显示，口服帕克替尼治疗后改善了肝损伤程度。天狼星红染色和α-SMA免疫组化染色结果显示，口服帕克替尼治疗后肝纤维化程度显著减轻。此外，口服帕克替尼还显著减少了小鼠肝脏纤维化相关的蛋白和mRNA表达水平。与静脉注射帕克替尼不同的是，口服帕克替尼治疗后ASH小鼠SREBP-1C和FASN的mRNA表达水平显著下降。这些结果表明口服帕克替尼治疗可改善ASH小鼠的肝损伤和纤维化程度，并且还改善了其脂肪变性。
作者研究了口服帕克替尼在非酒精性肝脂肪肝炎（NASH）小鼠模型中的治疗作用。结果显示，口服帕克替尼治疗后显著降低了CCl4/WD诱导小鼠升高的ALT、AST水平。H&E染色结果显示，口服帕克替尼治疗后改善了NASH小鼠的肝损伤程度。天狼星红染色和α-SMA免疫组化染色结果显示，口服帕克替尼治疗后NASH小鼠的肝纤维化程度显著减轻。此外，口服帕克替尼还显著减少了NASH小鼠肝脏纤维化相关的蛋白和mRNA表达水平。然而，在口服帕克替尼治疗的NASH模型中未观察到脂肪变性标志物mRNA表达的变化。综上所述，这些结果表明口服帕克替尼治疗可改善NASH小鼠模型中的纤维化发展，而不改变脂质积累。
一种口服JAK激酶抑制剂，具有针对野生型Janus相关激酶2(JAK2)、突变型JAK2 V617F形式和FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)的活性，这有助于多种细胞因子的信号传导和生长对造血和免疫功能很重要的因素。骨髓纤维化通常与JAK2信号失调有关。Pacritinib对JAK2的抑制活性高于其他家族成员JAK3和TYK2。在临床相关浓度下，pacritinib不抑制JAK1。如有需要，请咨询康必行海外医疗医学顾问：4006-130-650或扫码添加下方微信，我们将竭诚为您服务！点击拓展阅读：帕克替尼(PACRITINIB/VONJO)在肝纤维化中的治疗作用如何？
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